真核表达质粒pcDNA3.1-CSRP2-HA的构建及鉴定

Abstract

目的：构建并鉴定真核表达质粒PcDNA3.1-CSRP2-HA。方法：据GeneBank 中人CSRP2 CDS序列设计并合成引物，提取A549 细胞总RNA，并将其逆转录成cDNA作为模板,进行PCR 扩增，获得CSRP2 目的基因后,再与PcDNA3.1-HA载体进行连接重组，构建PcDNA3.1-CSRP2-HA 真核表达质粒，经限制性内切酶消化、PCR 及DNA 序列测序分析等方法鉴定后, 瞬时转染入A549细胞，Western blot 法检验CRP2 蛋白表达。结果：成功构建PcDNA3.1-CSRP2-HA 真核表达质粒，Western-blot 结果显示PcDNA3.1-CSRP2-HA 能够在A549 细胞中表达。结论：PcDNA3.1-CSRP2-HA真核表达质粒构建并鉴定成功，为后续研究CRP2在炎症诱发氧化损伤机制中的转录调控作用奠定了基础。