pBR322 DNA拓扑结构的原子力显微镜研究

Abstract

由大肠杆菌HB101细胞分离得到的pBR322 DNA(2μg/mL)溶解在Tris·HC1-EDTA)(1mmol/L,pH8.5)的溶液中. 取上述样品滴加在新鲜剥离的云母基底上,吸附约1min后,用磷钨酸染色,然后用滤纸吸去基底上多余的残液. 在大气下,用本实验室自行研制的原子力显微镜对其进行成象,获得了pBR322 DNA的分子分辨的原子力显微图象. 这些图象表明,pBR322 DNA存在若干种不同的拓扑结构:(1)带有不同直径的环状松弛形DNA;(2)超浓缩型DNA;(3)两个分子的连环拓扑结构,其中之一为松弛形,另一个处于凝聚状态(可能是超螺旋、或是分子内打结);(4)多分子连环拓扑结构,DNA凝集成多链复合物;(5)可能存在由单体转变成多聚体的中间体.